Browsing by Author "Wikman, Helena"

Sort by: Order: Results:

Now showing items 1-1 of 1
  • Wikman, Helena (2010)
    Prokaryooteilla tavattava proteiinipintakerros (eng. S-layer) on identtisistä proteiini- tai glykoproteiiniyksiköistä koostuva huokoinen ja verkkomainen solun pintarakenne, jonka on havaittu monilla Lactobacillus-suvun bakteereilla välittävän bakteerin kiinnittymistä isäntänsä epiteelisoluihin. Porsaille probioottisen L. amylovorus DSM 16698 -bakteerin genomisekvenssistä on löydetty ainakin kolme mahdollista pintakerrosproteiinigeeniä. Tässä tutkimuksessa selvitettiin L. amylovorus DSM 16698 -bakteerin ulkopintarakennetta ja bakteerin pintakerrosproteiinien kiinnittymisominaisuuksia porsaan IPEC-1 suolistoepiteelisolulinjan soluihin alustavien tuloksien pohjalta. Lisäksi eristettiin mahdollisia pintakerrosproteiinireseptoreja IPEC-1 -soluista. L. amylovorus DSM 16698 -bakteerin kloonattuja rekombinanttipintakerrosproteiineja rSlpA ja rSlpB kiinnitettiin bakteerista eristettyihin, fluoresenssileimattuihin soluseiniin natiivin pintakerrosrakenteen mimikoimiseksi ja muodostuneiden kompleksien kiinnittymistä IPEC-1 -soluihin tutkittiin sekä kvalitatiivisesti mikroskopoiden että kvantitatiivisesti fluoresenssimittauksilla. Kokeiden perusteella molemmat Slp-proteiinit välittävät L. amylovorus DSM 16698 -bakteerin adheesiota porsaan suolistoepiteelisoluihin in vitro. Kiinnittymistä tutkittiin myös inhibitiokokeilla käsittelemällä rSlp-proteiinit ennen adheesiota proteiineja vastaan tuotetuilla vasta-aineseerumeilla. Seerumikäsittelyn jälkeen proteiinien kiinnittyminen IPEC-1 -soluihin heikkeni. L. amylovorus DSM 16698 -bakteerin ulkopintarakennetta tutkittiin immunofluoresenssikokeilla rSlp-proteiinien vasta-aineiden avulla. Molemmat Slp-proteiinit esiintyvät L. amylovorus DSM 16698 -bakteerisolun pinnalla ja jakautuvat keskenään samalla tavoin ympäri solun pintaa. IPEC-1 -soluista eristettiin mahdollisia pintakerrosproteiinireseptoreja kokeessa, jossa rSlp-proteiinit soluseinään kiinnitettyinä reagoivat IPEC-1 -soluista eristettyjen membraaniproteiinien kanssa ja mahdolliset reseptorit yhdessä rSlp-proteiinin kanssa havaittiin SDS-PAGE -ajossa. Reseptorin eristyksessä saatiin toistettavasti sama proteiiniprofiili. Aiemmin on osoitettu, että L. amylovorus DSM 16698 -bakteerikanta kiinnittyy IPEC-1 - epiteelisolulinjaan, mutta bakteerin adheesiotekijöitä ei ole tutkittu tarkemmin. Tämä tutkimus osoitti L. amylovorus DSM 16698 -bakteerikannan pintakerrosproteiinien lokalisaation solun pinnalla ja pintakerrosproteiinien roolin bakteerin kiinnittymisessä porsaan epiteelisolulinjan soluihin.