HPLC-MS/MS-menetelmän kehittäminen ja validointi stevioliglykosidien määrittämiseen elintarvikkeista

Show full item record



Permalink

http://urn.fi/URN:NBN:fi:hulib-201606092266
Title: HPLC-MS/MS-menetelmän kehittäminen ja validointi stevioliglykosidien määrittämiseen elintarvikkeista
Author: Kahila, Katja
Contributor: University of Helsinki, Faculty of Agriculture and Forestry, Department of Food and Environmental Sciences
Publisher: Helsingfors universitet
Date: 2016
Language: fin
URI: http://urn.fi/URN:NBN:fi:hulib-201606092266
http://hdl.handle.net/10138/163680
Thesis level: master's thesis
Discipline: Livsmedelskemi
Food Chemistry
Elintarvikekemia
Abstract: E960 on stevioliglykosideistä koostuva makeutusaine, jolle on asetettu puhtaus- vaatimus sekä suurimmat sallitut käyttömäärät elintarvikkeissa. Makeutusaineen koostumuksesta 95 % tulisi olla steviosidiä, rebaudiosidejä A, B, C, D, E ja F, steviolibiosidiä, rubusosidiä ja dulkosidiä, sekä 75 % tästä steviosidia ja/tai reb A:ta. Stevioliglykosidejä on määritetty elintarvikkeista nestekromatografisilla menetelmillä, joiden keskeisin haaste on ollut huono resoluutio yleisimpien stevioliglykosidien steviosidin ja reb A:n välillä. Maisterintutkielman tavoitteena oli kehittää HPLC-MS/MS-menetelmä stevioliglykosidien määritykseen elintarvikkeista, sekä validoida se juomille ja maitotuotteille. Työssä kehitettiin HPLC-MS/MS-menetelmä makeutusaineen E960 yleisimpien stevioliglykosidien steviosidin sekä reb C:n ja A:n kvanti- tatiiviseen määritykseen sekä muiden stevioliglykosidien semikvantitatiiviseen määritykseen. HILIC-kolonnilla saavutettiin hyvä resoluutio ja saatiin kuusi valituissa elintarvikkeissa esiintyvää stevioliglykosidiä onnistuneesti erottumaan. Esikäsittelymenetelmä kehitettijuomille ja maitotuotteille. Molemmille matriiseille esikäsittelyyn kuului SPE-uutto C18-patruunoilla ja jogurtilla lisäksi rasvan ja proteiinien poisto. Esikäsittelymenetelmä soveltui stevioliglykosidien eristämiseen mehumatriisista, mutta ei täysin jogurttimatriisille. HPLC-MS/MS-menetelmä oli spesifinen ja selektiivinen stevioliglykosideille mehu- ja jogurttimatriisissa. Menetelmä oli oikeellinen, toistettava, lineaarinen ja sisäisesti uusittava mehulle, mutta ei jogurtille. Havaitsemis- ja määritysrajat steviosidille sekä rebaudiosideille C ja A olivat elintarvikkeissa odotettuihin pitoisuuksiin nähden moninkertaisesti pienempiä. Menetelmä validoitiin mehumatriisille, jolloin menetelmän kelpoisuus voidaan laajentaa juomille pois lukien maitojuomat. Menetelmää ei sen sijaan validoitu jogurttimatriisille eikä siten muille maitotuotteille. Maitotuotteiden esikäsittely vaatii lisää tutkimusta. HPLC- MS/MS-menetelmä soveltuu hyvin rutiini-työskentelyyn elintarvikevalvonnassa ja menetelmällä voidaan valvoa makeutusaineen E960 puhtausvaatimuksen ja käyttöön liittyvien asetuksien toteutumista.Steviol glycosides are constituents of a natural sweetener E960. High performance liquid chromatography (HPLC) in combination with UV or MS detection is the method of choice for the determination of steviol glycosides. The poor resolution between the two abundant steviol glycosides stevioside and rebaudioside A has been the main challenge in reported methods. The primary object of this study was to develop an HPLC-MS/MS-method for determination of the three most abundant steviol glycosides stevioside, rebaudioside A and rebaudioside C in foods. The purpose was also to validate the method for two different matrices, drinks and dairy products. The HPLC-MS/MS method allowed separation of six steviol glycosides. HILIC column showed great selectivity towards steviol glycosides, and a good resolution between stevioside and rebaudioside A was achieved. Sample preparation for drinks included SPE purification by C18 cartridge and for dairy products also fat removal and protein precipitation prior to SPE. In juice samples the HPLC-MS/MS method demonstrated good performance in terms of trueness, accuracy, repeatability, reproducibility and the LOQs for steviol glycosides were multifold smaller than the proposed use levels in foods. Conversely, trueness, accuracy, repeatability and reproducibility in yoghurt samples did not indicate good performance. The developed HPLC-MS/MS-method can be applied for routine monitoring of sweetener E960 in foods. The method was successfully validated for drinks, but not for dairy products. The sample preparation of dairy products needs still modification before validation can be accomplished.
Subject: E960
HPLC/MS/MS
stevioliglykosidit
SPE-uutto
HILIC-kolonni


Files in this item

Files Size Format View

There are no files associated with this item.

This item appears in the following Collection(s)

Show full item record